一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
試劑解凍與混勻
將試劑盒各組分從-20℃冰箱取出，在冰上緩慢融化后，短暫離心使液體沉于管底，充分混勻。
分區(qū)操作要求
實(shí)驗(yàn)應(yīng)在獨(dú)立的三個(gè)區(qū)域進(jìn)行：
試劑準(zhǔn)備區(qū)（配制PCR反應(yīng)液）
樣本處理區(qū)（提取DNA）
PCR擴(kuò)增區(qū)（上機(jī)檢測(cè)）
各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器、吸頭應(yīng)專用，避免交叉污染。
使用帶濾芯吸頭?，防止氣溶膠污染。
二、樣本處理（樣本處理區(qū)）
樣本類型
可使用皮膚刮屑、指甲碎片、毛發(fā)或培養(yǎng)菌落等。建議先進(jìn)行增菌培養(yǎng)以提高檢出率。
DNA提取
使用市售DNA提取試劑盒或試劑盒配套的裂解液進(jìn)行核酸提取。
若使用快速裂解法：將約100 mg樣本加入0.1 mL溶液A，95℃保溫10–15分鐘，再加0.1 mL溶液B混勻，取上清作為模板。
提取后DNA應(yīng)立即使用或-20℃保存。
設(shè)置對(duì)照
樣品制備陽性對(duì)照：在適量水中加入10 μL陽性對(duì)照的1000倍稀釋液。
樣品制備陰性對(duì)照：僅用水作為空白。
每批實(shí)驗(yàn)至少設(shè)置一個(gè)N+2樣本（N為待測(cè)樣本數(shù)）。
反應(yīng)管標(biāo)記與加樣順序：
標(biāo)記N+4個(gè)PCR管（N個(gè)樣品 + 1個(gè)PCR陰性對(duì)照 + 1個(gè)PCR陽性對(duì)照 + 2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品管，如需定量）
先加入PCR Mix和引物，再依次加入模板
最后加入陽性對(duì)照?，防止污染
